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如何选择培养基

信息采集:上海申启 发布时间:2017-03-28 点击:载入中...

如何选择好的培养基    

培养基选择方法    

选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:   

(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基;   

(2)可以查阅文献或在购买细胞株时咨询;   

(3)平常惯用的培养基;    

(4)许多培养基可以适合多种细胞,根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基;    

(5)用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断;    

(6)根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。   

培养基注意事项    

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。

防止污染应该注意以下事项:   从污染的源头开始    

确认工作细胞库是否被污染:用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。   

确认毒种工作种子批是否被污染:用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。    

确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染:用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。

实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。    

一些单位在使用血清时候往往不经过过滤除菌处理便直接加入到培养液中,可能带来污染。


其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。    

另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。   

从GMP管理、SOP操作方面加强管理力度    

每二周或每周对无菌操作室及洁净区域按GMP要求进行检测   

人员的GMP管理和无菌操作强化培训   

一些特殊情况    

细菌的大小从0.1-700μm,为防止细小细菌的污染,过滤除菌应尽量采用0.1μm的滤膜或滤芯。    

大面积污染时,应对所有设施、用具及操作环境进行彻底消毒。


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